該試劑盒使用專有染料，可根據(jù)線粒體膜電位梯度選擇性累積在線粒體中。線粒體指示劑是一種疏水性化合物，可以很容易地滲透完整的活細(xì)胞，并在進(jìn)入細(xì)胞后被保留在線粒體中，該熒光線粒體指示劑長(zhǎng)時(shí)間保留在線粒體中，因?yàn)樵撝甘緞в卸ㄎ患?xì)胞的基團(tuán)，這一關(guān)鍵特征顯著提高了染色效率。該試劑盒設(shè)計(jì)十分穩(wěn)定，需要很少的動(dòng)手操作時(shí)間。它適用于各種熒光平臺(tái)，如酶標(biāo)儀分析、免疫組化和流式細(xì)胞術(shù)；它廣泛用于多種熒光研究，包括細(xì)胞粘附、趨化性、多藥耐藥性、細(xì)胞活力、細(xì)胞凋亡和細(xì)胞毒性。該試劑盒為所有重要組分提供了優(yōu)化的細(xì)胞標(biāo)記方案。它適用于增殖和非增殖細(xì)胞，可用于懸浮細(xì)胞和貼壁細(xì)胞。

樣品分析

1.準(zhǔn)備線粒體染色溶液：

1.1將所有組件溫度調(diào)至室溫。

1.2通過將20μLMitolite Red（組分A）稀釋到10mL活細(xì)胞染色緩沖液（組分B）中制備染料工作溶液。

注1：對(duì)于一個(gè)96孔板，20μL的500X Mitolite Red（組分A）就足夠了。在≤-20oC下等分并儲(chǔ)存未使用的500X Mitolite Red。避光，避免反復(fù)凍融循環(huán)。

注2：熒光線粒體指示劑的最佳濃度根據(jù)具體應(yīng)用而變化?？梢愿鶕?jù)特定細(xì)胞類型和細(xì)胞或組織對(duì)探針的滲透性來修改染色條件。

2.準(zhǔn)備和染色細(xì)胞：

2.1對(duì)于粘附細(xì)胞：在96孔黑色墻壁/透明底板上或在裝有適當(dāng)培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿內(nèi)的蓋玻片上培養(yǎng)細(xì)胞。當(dāng)細(xì)胞達(dá)到所需的匯合時(shí)，加入等體積（例如對(duì)于96孔板為100μL，對(duì)于384孔板為25μL）的染料加工溶液（來自步驟1.2）。將細(xì)胞在37oC，5％CO₂培養(yǎng)箱中孵育30分鐘至2小時(shí)。用Hanks和20mM Hepes緩沖液（HH緩沖液）或您選擇的緩沖液（例如濃度為1：1的生長(zhǎng)培養(yǎng)基緩沖液）替換染料上樣溶液。

注意：如果細(xì)胞看起來沒有充分染色，建議增加標(biāo)記濃度或孵育時(shí)間以使染料積累。

2.2對(duì)于懸浮細(xì)胞：以1000rpm離心細(xì)胞5分鐘以獲得細(xì)胞沉淀并吸出上清液。在預(yù)熱（37℃）生長(zhǎng)培養(yǎng)基中輕輕重懸細(xì)胞沉淀，并加入等體積的染料加工溶液（來自步驟1.2）。將細(xì)胞在37oC，5％CO₂培養(yǎng)箱中孵育30分鐘至2小時(shí)。用Hanks和20mM Hepes緩沖液（HH緩沖液）或您選擇的緩沖液（例如濃度為1：1的生長(zhǎng)培養(yǎng)基緩沖液）替換染料上樣溶液。

注1：如果細(xì)胞看起來沒有充分染色，建議增加標(biāo)記濃度或培養(yǎng)時(shí)間以使染料積累。

注2：懸浮細(xì)胞可以附著在用BD Cell-Tak?（BD Biosciences）處理過的蓋玻片上，并作為粘附細(xì)胞染色（見步驟2.1）。